Các nhà nghiên cứu nghiên cứu các túi ngoại bào (EV) thường phải đối mặt với những thách thức liên quan đến tiêu chuẩn hóa, khả năng tái sản xuất và độ nhạy. Các công cụ đáng tin cậy và thuốc thử chất lượng cao là điều cần thiết để thực hiện những khám phá mang tính đột phá trong lĩnh vực giao tiếp giữa các tế bào phức tạp.
Tiểu cầu, mặc dù là những mảnh tế bào nhỏ trong máu, nhưng chứa nhiều chất hoạt tính sinh học và đóng vai trò quan trọng trong việc tạo ra exosome và điều hòa chức năng. Được lấy cẩn thận từ những người hiến tặng khỏe mạnh, các exosome có nguồn gốc từ tiểu cầu của con người được phân lập và tinh chế bằng cách sử dụng kỹ thuật lọc dòng tiếp tuyến (TFF) và sắc ký loại trừ kích thước (SEC) tiên tiến. Những exosome này giữ lại các đặc tính sinh học vốn có, khiến chúng trở nên lý tưởng để nghiên cứu các chức năng EV, đóng vai trò kiểm soát tích cực và hiệu chỉnh các phương pháp phân tích.
Để tối đa hóa hoạt động và độ ổn định của exosome, quy trình đông khô tiên tiến sẽ loại bỏ độ ẩm một cách hiệu quả, kéo dài thời hạn sử dụng lên đến 24 tháng mà không cần bảo quản ở dây chuyền lạnh nghiêm ngặt (nên bảo quản ở 4°C). Sự ổn định lâu dài này giúp đơn giản hóa việc lập kế hoạch thử nghiệm và quản lý hàng tồn kho trong khi vẫn đảm bảo quyền truy cập nhất quán vào các tài liệu nghiên cứu chất lượng cao.
Những exosome đông khô này đóng vai trò là đối chứng tích cực đáng tin cậy trên nhiều kỹ thuật phân tích EV. Dưới đây là các hướng dẫn sử dụng được đề xuất (có thể cần điều chỉnh dựa trên các điều kiện thử nghiệm cụ thể):
| Kỹ thuật ứng dụng | Số lượng đề xuất |
|---|---|
| Phân tích theo dõi hạt nano huỳnh quang (F-NTA) | 1µg |
| Hình học dòng chảy | 5µg |
| ELISA | 10-20µg/giếng |
| Western Blot | 10-20µg/làn |
Các EV siêu ly tâm và EV phân lập TFF được nhuộm bằng Bộ phát hiện Tetraspanin F-NTA EV và được phân tích bằng ZetaView® x30, thể hiện đặc tính chính xác ở cấp độ nano. Xác thực bổ sung bằng cách sử dụng thuốc thử phát hiện F-NTA CD9, CD63 và CD81 đã xác nhận các mẫu biểu hiện dấu hiệu cụ thể trong EV có nguồn gốc tiểu cầu.